在最近的一份报告中，Seo等证明非特异性阳离子通道TRPC6和西地那非的基因缺失均提供了几乎等效的保护，以抵抗急性牵张引起的心律不齐，这对离体mdx心肌细胞的钙调节异常有影响，这表明PDE5抑制作用会抑制TRPC6的通透性。从而减少了TRPC6介导的Ca2+内流。这种作用可能是Thr69上PKG依赖的TRPC6磷酸化的结果（在小鼠中；在人和狗中是Thr70）。虽然LV基因表达PDE5A不与他达拉非治疗改变（蛋白水平通过免疫印迹检测不到），二者的表达TRPC3和TRPC6阳离子通道趋向于治疗的GRMD狗的左室表达降低。
一致的是，LV裂解物的免疫印迹表明TRPC6在蛋白质水平上有所降低，并通过免疫沉淀法测定，其总Thr磷酸化程度高出≈25％，用他达拉非治疗。尽管PKG介导的通过Thr11磷酸化对TRPC3活性的调节是另一种潜在的有益机制，但29在任何样品中直接上样都无法检测到它的蛋白水平，免疫沉淀实验表明TRPC3的总Thr磷酸化状态比未处理降低了>50％。GRMDLV裂解液。这些结果进一步增强了TRPC6在营养不良性心肌表型中的作用，因为含量的减少和磷酸化的增加与表型的改善同时发生。
在处理过的GRMDLV样品和对照GRMDLV样品之间，蛋白酶含量也有所不同。在这些心脏中，代表了25个月时GRMD心脏的基础状态（与之前的实验中的mdx相对），μ-钙蛋白酶的水平相对不变。相比之下，治疗过程中m-钙蛋白酶（一种主要为外周蛋白酶）的含量大大降低。肌节蛋白的cTnI重合不变内容与结构/外周蛋白α血影（150kDa）的，α辅肌动蛋白（80kDa）的，整合素β1（75kDa）的，和dysferlin（80kDa）的减少裂解产物在他达拉非处理的心脏证实较低水平和外周活动的概念米钙蛋白酶在这些未刺激营养不良心。然而，我们没有注意到PKG1α含量或GSK3β或ERK1/2的磷酸化状态发生了变化，尽管观察到ANP下降以及内皮和神经元一氧化氮合酶的适度增加。
根据这些经过长期他达拉非治疗的心脏中m-钙蛋白酶含量和活性的降低，我们发现卵磷脂的含量增加了>80％，一种已知的钙蛋白酶靶标34，可以在功能上替代mdx小鼠中的肌营养不良蛋白。冷冻LV切片的免疫荧光结果表明，在相同的成像条件下，未治疗和他达拉非治疗的心脏中的肌膜局部化的卵磷脂比健康狗的水平都增加了，治疗后的样品显示出比未治疗的样品更强的肌膜染色。卵磷脂蛋白基因表达缺乏差异表明，卵磷脂蛋白水平的这种提高可能是由于蛋白水解降低而不是基因上调所致。
为了解决在使用他达拉非治疗的GRMD心脏中25个月时的观察结果是年龄依赖性还是衰老依赖性，我们评估了8个月大的已治疗和未治疗的GRMD狗（每次治疗1只）的LV样本，这些样本在可检测到的心脏发作之前功能下降。在8个月时，他达拉非治疗的LV表现出较低的TRPC6和m-钙蛋白酶水平，同时伴有α-肌动蛋白裂解产物减少和卵磷脂含量增加。与25个月的队列一样，他达拉非治疗的LV比对照犬表现出更多的肌膜性卵磷脂和减少的心肌病理征象（如苏木精和曙红染色所示）。他达拉非诱导的γ-糖聚糖水平增加和肌膜局部化建议观察到的促卵磷脂增加与其他肌营养不良蛋白-糖蛋白复合体成员相吻合。
我们没有发现任何趋势RNA的内容结合蛋白KSRP或细胞骨架调节GTP酶的RhoA，肌养相关蛋白的两个转录后调节器，表明，它们参与的utrophin的他达拉非诱导的标高。其可以是能够靶向肌营养不良蛋白糖蛋白复合物的成员中，的MMP2和MMP9，额外的蛋白酶的表达模式不支持它们在这现象的参与，虽然出现MMP2活化是心肌病发病中的标志物GRMD心。他达拉非不影响mdx的卵磷脂含量短期（10周）或长期（8个月）治疗后的心脏。总之，这些数据表明，除了对间歇性急性应激源的保护（如前所述）外，他达拉非（Ttadalafil）还通过减少和失活通道来降低TRPC6的通透性，从而延缓GRMD心肌病的发生，从而降低m-钙蛋白酶的含量和活性，并导致降低未受刺激的心脏中外周和结构蛋白（特别是促卵磷脂）的蛋白水解，从而增强肌膜稳定性。详情请扫码咨询：
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