达拉非尼Dabrafenib耐药性的发展

　　背景：　　

　　BRAF突变黑色素瘤患者对BRAF抑制剂(BRAFi)和MEK(MEKi)的耐药性的发展仍然是靶向治疗的一大挑战。在这里，我们探索了miRNAs在黑色素瘤获得性braafi耐药中的作用。　

　　方法：　　

　　使用Affymetrixgenchip®miRNA3.1微阵列和/或qRT-PCR检测两个braf突变黑色素瘤细胞系及其dabrafenib耐药亚系的miRNA表达。采用MTT法、流式细胞术、免疫印迹法、Boyden小室侵袭法和ELISA法评估miR-126-3p重表达对达拉非尼耐药亚型细胞增殖、凋亡、细胞周期、ERK1/2和AKT磷酸化、达拉非尼敏感性、侵袭性和VEGF-A分泌的影响。免疫印迹法检测敏感细胞和达拉非尼耐药细胞中ADAM9、PIK3R2、MMP7和CXCR4的表达。通过小RNA干扰研究VEGFA或ADAM9沉默对耐药亚株增殖、侵袭性或达拉非尼敏感性的影响。在达拉非尼敏感的细胞中进行了长期增殖试验，以评估miR-126-3p表达增强或ADAM9沉默对耐药性发展的影响。采用ELISA法对braafi或BRAFi+MEKi治疗的黑色素瘤患者血清VEGF-A水平进行基线(T0)、治疗两个月(T2)和进展(TP)的评估。　　

　　结果：　　

　　miR-126-3p在达拉非尼耐药亚型中显著下调，与亲代相比。miR-126-3p替代耐药细胞可抑制增殖、细胞周期进展、ERK1/2和/或AKT磷酸化、侵袭性、VEGF-A和ADAM9表达，并增加达拉非尼的敏感性。VEGFA或ADAM9沉默抑制耐药亚株的增殖和侵袭性。耐药细胞中ADAM9的敲除增加了达拉非尼的敏感性，而药物敏感细胞中miR-126-3p的强制表达或ADAM9沉默则延迟了耐药的发展。在T0和T2，对治疗有反应的患者和没有反应的患者的VEGF-A血清水平观察到有统计学意义的差异。在有应答的患者中，TP组和T2组VEGF-A水平显著升高。　　

　　结论：　　

　　恢复miR-126-3p表达或靶向VEGF-A或ADAM9可以抑制达拉非尼耐药黑素瘤的生长和转移，提高其药物敏感性。循环VEGF-A是预测患者对BRAFi或BRAFi+MEKi反应和监测耐药开始的一个很有前途的生物标志物。　　

　　在这项研究中，我们发现miRNA表达谱的变化与黑素瘤细胞获得性耐药达拉非尼相关，而已知参与黑素瘤进展和侵袭性血脑缺血的miR-126-3p是最下调的miRNA之一。miR-126-3p的重新表达或沉默其靶基因VEGFA或ADAM9会削弱达拉非尼耐药细胞的增殖和侵袭性。此外，在这些细胞中，miR-126-3p的替代以及ADAM9的下调增加了对BRAFi的敏感性或抵消了其刺激生长的作用。　　

　　值得注意的是，在药物敏感细胞中miR-126-3p的强制表达或ADAM9沉默延缓了长期暴露于达拉非尼Dabrafenib后耐药性的发展。最后，我们发现在接受BRAFi或BRAFi+MEKi治疗的黑色素瘤患者中，血清VEGF-A水平高与临床反应差相关。因此，替代miR-126-3p或抑制VEGF-A或ADAM9的表达可能是提高BRAFi疗效的新治疗方法。此外，循环VEGF-A可能是一个有用的生物标志物，以改善患者选择靶向治疗和监测耐药性的开始。详情请扫码咨询：