他拉唑帕尼（Talazoparib）从塞勒克化学公司（Selleck Chemicals）获得，并保存在-20°C下，直至药物制备如先前所述8。将0.1 mg / mL他拉唑帕尼在10％的二甲基乙酰胺，5％的聚乙氧基化蓖麻油和85％的PBS或溶媒中的溶液在4°C下保存2周，并在口服管饲之前用PBS稀释。
使用公式体积=（xy2）/ 2，通过手动卡尺测量来计算肿瘤体积，其中x是最长的直径，y是垂直于皮肤表面的切线。对于所有的肿瘤生长抑制实验，将小鼠随机分成约125–150 mm3的肿瘤体积，并在周一至周五每天服用他拉唑帕尼或媒介物，共20剂。每周两次测量小鼠的体重和肿瘤体积，直到小鼠在肿瘤大小为1000-1500 mm3处被安乐死为止。
为了测试他拉唑帕尼和放疗的组合，按上述方法用0.1 mg / kg或0.3 mg / kg他拉唑帕尼治疗媒介物，并在第2-5天每天添加4个2 Gy的每日放射剂量。用氯胺酮和甲苯噻嗪注射麻醉小鼠，并用X射线辐照器（XRAD 320，Precision X-Ray）辐照肿瘤。给药后3小时进行放射治疗。使用定制的铅切口来减少对正常小鼠组织的剂量。
放射性示踪剂PARPi如先前所述那样来合成。在放射性示踪剂注射前1、3、6、18或24小时通过口服管饲法向小鼠施用0.1、0.2或0.3 mg / kg剂量的他拉唑帕尼。静脉放射示踪剂的给药发生在成像前两个小时，其中150–300μCi PARPi，溶于100％至200μL的10％乙醇和0.9％的无菌盐水中。在放置在扫描仪床上之前，通过吸入2％异氟烷麻醉小鼠。使用Inveon PET / CT（西门子）捕获PET / CT图像。根据放射性示踪剂的活性，在5-15分钟内获得PET图像，然后进行CT扫描。使用Inveon Research Workplace软件分析PET / CT图像。使用CT图像绘制肿瘤轮廓，量化平均和最大肿瘤PET活性，并报告为每克注射剂量百分比（％ID / g）±SD。
成像后立即将小鼠安乐死并解剖。将肿瘤片段快速冷冻以进行离体分析，或将其作为器官纳入生物分布研究。如前所述23进行了成像后生物分布研究。简而言之，在PET / CT成像后立即对小鼠实施安乐死并收集主要器官并称重。然后使用Wizard2自动γ计数器对器官放射性示踪剂的活性进行定量。
通过口服管饲法向每个时间点三只小鼠施用0.2 mg / kg 他拉唑帕尼，并在给药后1、3、6、18和24小时安乐死以收集速冻肿瘤组织。为了比较0.1和0.3 mg / kg剂量，如上所述，在动物PET / CT成像，安乐死和解剖后收集了速冻的肿瘤组织。使用PARP体内药代动力学分析II试剂盒（Trevigen）裂解肿瘤并定量PAR值。
对于体内肿瘤生长延迟，使用Kaplan-Meier分析和对数秩检验比较达到1000mm3的时间，并且使用Mann-Whitney检验比较平均值。对于PET成像研究，使用Welch的ANOVA和Dunnett检验对治疗组和未治疗的对照组进行比较，以调整多次比较。用t检验和Holm-Sidak方法对0.1和0.3 mg / kg的他拉唑帕尼组进行了比较，以校正多次比较。离体之间的相关性通过计算带有两个尾部p值的Pearson相关系数，在一个小时的时间点分析肿瘤PAR值和PET活性。P值<0.05被认为是显着的。所有分析均使用GraphPad Prism 7.0a进行。现在他拉唑帕尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。
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