我们接下来询问克唑替尼（crizotinib）介导的 BCL2 水平增加是否可以限制药物的细胞毒性作用。因此，我们对 BCL2 敲低或未敲除以及是否用克唑替尼治疗的细胞进行了活力测定、细胞周期分析和膜联蛋白 V/PI 染色。BCL2 敲低（通过蛋白质印迹分析确认）是通过使用针对 BCL2 mRNA 的靶向 siRNA 或 miR-34a 模拟物的 RNA 干扰实现的，这是另一种有希望的 BCL2 靶向临床应用策略。
活力测定表明，BCL2 敲低抑制了克唑替尼处理细胞中 BCL2 的升高（不上调其他 BCL2 家族亚型，包括 MCL1、BCL-XL/S 和 BCL-W；数据未显示），显着增强了克唑替尼的影响，因为与大约 50% 的 siCTL 转染细胞相比，只有 20% 的 siBCL2 转染细胞在 72 小时后仍然存活。当使用 miR-34a 模拟物实现 BCL2 敲低时，对细胞活力的影响更显着，因为在联合治疗结束时只有 6% 的细胞是存活的。
然后，我们通过分析 BCL2 沉默和克唑替尼治疗对细胞周期分布的影响，探讨了这种细胞活力的丧失是否与细胞生长的减少有关。我们发现使用靶向 siRNA 下调 BCL2 不会增加有效的 G1-S 期细胞周期停滞或在克唑替尼治疗后观察到的亚 G1 期细胞数量。相反，使用 miR-34a 模拟物本身诱导了 G1 期的阻断和亚 G1 期细胞数量的增加，这在添加克唑替尼后进一步增强。
为了更好地评估 BCL2 敲低对细胞死亡的影响，我们进行了膜联蛋白 V/PI 染色。我们的数据首先表明，克唑替尼处理（500 nM，72 小时）诱导细胞凋亡，这反映在 siCTL 和 miR-Neg 条件下膜联蛋白 V 染色的细胞数量显着增加。此外，与联合治疗后观察到的细胞活力急剧下降一致，我们观察到 BCL2 敲低引发了克唑替尼处理的细胞中凋亡细胞死亡的增加，正如膜联蛋白 V 数量的显着增加所揭示的-染色的细胞和 caspase 3/7 的激活。
总之，我们的数据表明，克唑替尼对表达 ALK 的 ALCL 细胞的细胞毒性作用受到 BCL2 水平升高的限制。事实上，我们证明除了克唑替尼治疗外，BCL2 下调主要通过增加凋亡细胞死亡来增强克唑替尼诱导的细胞活力丧失。值得注意的是，使用另一种 ALK 阳性 ALCL 细胞系 SU-DHL-1 获得了类似的细胞活力和细胞凋亡结果。现在克唑替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。
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