克唑替尼Crizotinib敏感性调查

　　为了进一步表征升高的IL10RA表达对ALKTKI诱导的细胞毒性的影响，我们在ALK+ALCL细胞系中表达了靶向IL10RA的sgRNA。表达3种sgRNA中的至少2种会导致克唑替尼敏感性降低，尤其是在补充IL-10。　　

　　有趣的是，仅在补充IL-10后才观察到过表达DEL10细胞的DEL细胞中的克唑替尼敏感性降低。如预期的那样，这些sgRNA的大多数也促进了对二线ALK抑制剂（阿雷替尼/布雷加替尼/洛拉替尼）的敏感性降低。此外，与先前描述的原位异种移植物42的3种媒介物对照治疗的肿瘤相比，每天用1或2mg/kg氯雷替尼治疗两次的3种洛洛替尼耐药性肿瘤中的2种，IL10RA显着上调。　　

　　为了研究在ALK抑制剂存在下IL10RA过表达如何使细胞存活，我们评估了细胞增殖和凋亡。在不存在克唑替尼的情况下，靶向IL10RA的3种靶向sgRNA均未促进增殖，提示增殖增加无法促进细胞存活。另一方面，当用克唑替尼（Crzotinib）处理细胞后，大多数IL10RAsgRNA都能在一定程度上阻止细胞凋亡，在存在克唑替尼的情况下，所有3种靶向IL10RA的sgRNA均具有显着的减少凋亡的能力，尤其是在将IL-10添加到生长培养基中时。接下来，我们用嘌呤霉素选择质粒60过表达IL10RA，并可以证实sgRNA介导的CRISPR过表达所获得的结果。　　

　　因为这些数据暗示了IL10RA介导的克唑替尼耐药性依赖于IL-10的可能性，所以我们接下来评估了单独的IL10/IL-10过表达是否可以驱动克唑替尼耐药性。在ALK中没有观察到降低的克里唑替尼的敏感性或在细胞凋亡的减少+/ALK-当生长培养基中补充有IL-10时的ALCL细胞系。　　

　　与该观察结果一致，在没有crizotinib的情况下，在相同的ALCL细胞系中2个靶向IL10的sgRNA的过表达不会促进增殖，在存在crizotinib的情况下也不会提高生存率。该观察结果突出了以下事实：IL10RA的表达是这些细胞系中IL-10信号传导的限制因子。　　

　　为了了解抑制IL10/IL10R复合物的任何成分是否会使细胞对克唑替尼Crizotinib治疗敏感，我们如上所述使用每个基因使用6个sgRNA，进行了基于CRISPR-Cas9的IL10/IL10RA/IL10RB基因敲除；我们验证了靶向IL10RA的2种sgRNA的敲除效率。我们发现，与输入对照细胞（D0）相比，用克唑替尼处理14天的TS/K299细胞中，靶向IL10/IL10RA的sgRNA显着减少了。详情请扫码咨询：