吉非替尼Gefitinib抑制糖酵解并诱导非小细胞肺癌细胞程序性细胞死亡

　　目的：观察吉非替尼Gefitinib在非小细胞肺癌A549和H1975细胞中诱导的细胞死亡模式，并从糖酵解的角度探讨可能的机制。　

　　方法：使用MTT法检测20、30或40μmol/L吉非替尼Gefitinib对A549细胞和20、40或80μmol/L吉非替尼Gefitinib对H1975细胞的抑制作用。采用乳酸试剂盒检测细胞内乳酸水平的变化，Westernblotting检测糖酵解相关蛋白（PKM2和HK2）和PI3K-Akt-mTOR信号通路蛋白的表达水平。2-NBDG检测细胞葡萄糖摄取能力，ATP试剂盒检测细胞内ATP水平。JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位，AnnexinV-FITC/PI双染分析细胞凋亡。Westernblotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和自噬标志蛋白LC3B的相对表达水平。　　

　　结果：MTT法显示吉非替尼Gefitinib抑制A549和H1975细胞增殖呈时间和剂量依赖性（P＜0.05）。吉非替尼Gefitinib在24、48和72h的IC50在A549细胞中分别为48.6、28.6和19.7μmol/L，在H1975细胞中分别为321.6、49.1和14.6μmol/L。吉非替尼Gefitinib显着降低细胞内乳酸水平（P<0.05）并下调PKM2和HK2蛋白（P<0.05）和PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白的表达（P<0.05）。　　

　　吉非替尼Gefitinib明显抑制A549和H1975细胞的葡萄糖摄取和ATP水平（P<0.05）。吉非替尼Gefitinib处理后细胞凋亡明显增强，导致细胞凋亡率分别为（10.77±1.0）%、（14.5±0.4）%、（17.4±0.2）%和（32.1±0.6）%在0、20、30和A549细胞中40μmol/L(P<0.05)和(10.5±0.6)%、(13.2±0.92)%、(18.9±0.98)%和(35.1±1.4)%在0、20、40和80分别在H1975细胞中为μmol/L(P<0.05)。　　

　　吉非替尼Gefitinib处理后细胞中Bax蛋白表达增加，Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）。吉非替尼Gefitinib显着增加了A549和H1975细胞中的自噬，如治疗后LC3B表达增加所示（P<0.05）。　　

　　结论：吉非替尼Gefitinib可抑制A549和H1975细胞增殖，诱导凋亡，增加自噬。吉非替尼Gefitinib可能通过影响糖酵解和PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导细胞凋亡。详情请扫码咨询：