克唑替尼/赛可瑞联合化疗在p53途径中的潜在作用

　　为了进一步评估克唑替尼（赛可瑞）联合化疗在p53途径中的潜在作用，我们用媒介物，克唑替尼，拓扑替康处理了NB-1643，SH-SY5Y和NB-EBc1细胞，或克唑替尼加拓扑替康，每种细胞系各自IC50的分次剂量。为了评估单一药物和联合疗法对ALK信号传导的影响，在收集细胞进行免疫印迹分析之前，将细胞处理8小时。

　　克唑替尼单独或与托泊替康组合可导致所有三个细胞系中磷酸化ALKY1604的剂量依赖性消除，以及裂解的caspase-3的上调是单药和联合疗法的IC50剂量的一倍和两倍。我们还评估了在处理过的细胞中磷酸化的p53s15和总p53的水平，以及p53激活的下游标记p21和PUMA。可以预期，作为一种DNA破坏剂，拓扑替康在所有细胞系中均诱导了磷酸化和总p53上调。

　　克唑替尼增加了对克唑替尼敏感的药物NB-1643中磷酸化p53s15的水平，而在对克唑替尼不敏感的SH-SY5Y和NB-中却没有EBc1细胞，无论caspase-3激活如何。然而，在联合处理的细胞中，发现两种形式的p53以及p21和PUMA都被高度上调至暗示大于加和的水平。实际上，对光带的光密度分析表明，磷酸化p53S15，p21的增加明显更高联合处理的细胞中，和裂解的caspase-3，表明这些试剂相互协作以诱导更大的细胞凋亡。

　　携带克唑替尼，topo/cyclo和联合用药治疗携带SH-SY5Y和Felix-PDX的肿瘤3天。最后治疗后4小时收集肿瘤，裂解并通过免疫印迹分析。在SH-SY5Y中，标准剂量的克唑替尼（100mg/kg）不会改变磷酸化ALK的水平，与先前的结果一致，表明该剂量不足以消除ALK信号传导。出乎意料的是，单独的topo/cyclo降低了总ALK和磷酸化ALK的蛋白质水平。镜像体外描述的效果，与单独使用topo / cyclo和克唑替尼/的药物相比，联合治疗的总磷酸化p53和裂解的caspase-3的水平更高。定量分析表明，与所有其他治疗方法（包括单独的topo/cyclo）相比，该组合诱导的磷酸化p53水平明显更高。

　　最后，与SH-SY5Y结果一致，使用topo / cyclo +/-治疗克唑替尼显示Felix-PDX患者衍生的肿瘤中总ALK表达降低。在topo / cyclo和topo / cyclo + 克唑替尼/治疗的肿瘤中观察到磷酸化的p53和caspase-3均上调，但与单独使用topo/cyclo相比，联合疗法中这两种蛋白质的水平没有明显提高。为了探讨p53在介导克唑替尼和化疗之间协同作用中的潜在作用，我们使用两种不同的shRNA载体建立了p53敲低的NB-1643和SH-SY5Y细胞。

　　与两种载体分别通过GFP进行转导的对照相比，两种细胞系均显示出超过60％的p53敲减。用DIMSCAN测试了克唑替尼+拓扑替康/4-HC在这些品系中的组合，发现GFP转导的对照品系具有协同作用，与之前使用亲本NB-1643和SH-SY5Y的DIMSCAN结果一致线。值得注意的是，NB-1643或SH-SY5Y p53敲低系废除了协同作用。现在克唑替尼在哪里购买？更多详情可咨询下方微信。