单药效应所需克唑替尼/赛可瑞

　　使用Chou和Talalay开发的组合指数（CI）方法分析了结果的协同作用，累加作用或拮抗作用。通过此方法获得的定量CI值定义为：如果CI

　　其次，将用于提供相同效果的两种药物的浓度放在同一图中。当克唑替尼和托泊替康的浓度分别位于细胞系的下方，上方或上方时，表明具有协同作用，可加性或拮抗作用。所有细胞系均以其预定的接种密度铺板，并在24小时后进行处理。处理后8小时收获细胞，并根据先前描述的方案裂解。使用BCA方法计算蛋白质浓度，并在4％–12％Bis-Tris梯度凝胶上分离30–50ug蛋白质，将其在4°C下过夜转移至PVDF膜（Millipore），并针对pALKY1604，总ALK和Cleaved进行免疫印迹Caspase-3，裂解的PARP，磷酸化p53S15，p21，PUMA，GAPDH和β-肌动蛋白和MDM2（Abcam）和总p53在4°C过夜。

　　除GAPDH和β-肌动蛋白以1：5000稀释外，所有一抗均以1：1000稀释。洗涤膜，并用1：10,000的稀释度的二抗（Santa Cruz）探测。当探测多种蛋白质时，使用0.1 M甘氨酸，0.5％Tween 20剥离膜两次，持续30分钟。 对于体内统计分析，使用混合效应模型来评估经过处理的样品与媒介物对照之间随时间推移的肿瘤体积。

　　无事件存活率（EFS）定义为在治疗期间存活的小鼠百分比，其中存活率定义为缺少“事件”。事件定义为肿瘤体积超过3 cm3或初始肿瘤体积的4倍，此时处死小鼠并退出研究。使用Kaplan-Meier方法估算EFS百分比，并使用Log-Rank检验比较生存曲线。使用R统计编程语言中的“ nlme”，“ survival”和“ multcomp”软件包进行了统计分析。统计显着性定义为p值<0.05。 对于体外光密度分析，使用Image J软件（1.47v; NIH）量化条带强度。当p值<0.05时，结果被认为具有统计学意义。通过免疫印迹带的定量估计蛋白质水平。通过对数据进行线性回归（以媒介物为Y截距）来分析体外结果。将每个治疗组的值取平均值，然后在各组之间进行比较。

　　对于体内蛋白质印迹定量，由于每条泳道代表一只小鼠，并且每组有几只小鼠，因此以每只小鼠作为复制品对各组进行分析。对这些样本进行了方差分析，并进行了Tukey显着性差异（HSD）事后检验，以检验两组之间的显着性。结果的显着性指定如下：* p<0.05，** p <0.01，p <0.001。报告的误差是平均值的标准误差（SEM）。 NB-1643和SH-SY5Y细胞用靶向p53的逆转录病毒或copGFP对照）稳定转染。选择感染的细胞并保存在含有0.5μg/ ml嘌呤霉素的培养基中。通过qRT-PCR测量敲低效率，将TP53的表达水平标准化为两个管家基因IPO8和UBC的几何平均值。

　　所有qRT-PCR反应均重复三次。 ΔΔCT方法用于分析倍数变化，与GFP对照相比，计算了敲除百分比。 通过用25 uM美法仑（L-PAM）处理细胞16小时并测定总p53，MDM2和p21的诱导来测试P53功能。对归一化至上样对照的p21蛋白条带进行光密度分析。将功能性p53定义为与未处理的对照相比，经L-PAM处理后p21的增加大于2倍。现在克唑替尼在哪里购买？更多详情可咨询下方微信。