克唑替尼/赛可瑞是神经母细胞瘤中研究最多的ALK抑制剂

　　在8％的神经母细胞瘤肿瘤中观察到ALK突变，覆盖了从先天性病例到青少年和年轻人的整个患者范围。在高危患者中，ALK畸变的发生率是14％（10％点突变和4％扩增），并且可以独立预测不良结果，从而支持在诊断ALK状态时对预后和治疗分层进行诊断这些高危患者。在三个位置的体细胞ALK突变最常发生在成神经细胞瘤中，位于ALK激酶结构域的关键调控区。带有R1275Q突变的细胞系最初对直接的ALK激酶抑制敏感，而带有F1174-和F1245-残基突变的细胞则相对抗性。生化研究表明，F1174L突变对克唑替尼（赛可瑞）和其他ATP竞争性ALK抑制剂的敏感性降低，部分原因是必须增加剂量的ALK抑制剂或采用其他治疗方式来补偿ATP结合亲和力的增加。

　　克唑替尼是神经母细胞瘤中研究最多的ALK抑制剂，目前已完成的儿科1期临床试验和正在进行的2期临床试验已显示了部分神经母细胞瘤患者的活性，但反应的频率和持续时间有限。克唑替尼与常规遗传毒性药物合用可能比单独使用的任何一种方法都具有更好的抗肿瘤活性。 TP53抑癌基因是细胞凋亡，衰老，细胞周期停滞和DNA修复的关键调节因子，与许多成年癌症不同，它在神经母细胞瘤中保留了野生型活性。神经母细胞瘤可在化疗期间获得持续的高水平耐药性，这可归因于获得性p53突变和/或p53功能丧失。

　　利用这一主要途径并开发诱导p53功能激活的策略可能会提供增强治疗功效的机会。在本研究中，我们试图提供临床前数据，以支持将克唑替尼整合到多药化疗的高危神经母细胞瘤患者中。 将雌性CB17 SCID小鼠皮下植入人神经母细胞瘤NB-1643，NB-EBc1，SK-N-AS，NB-SD（ALK-WT，TP53-C176F突变）和NB-1691异种移植物和Felix-PDX（ALK-F1245C，TP53 WT）患者来源的异种移植物（PDX）从死于进行性MYCN-非扩增性高危神经母细胞瘤的患者的血液中进行死后鉴定。

　　将具有200 mm3大小的植入肿瘤的小鼠随机分为10种，每组10种。在研究开始时使用数字卡尺测量肿瘤，在治疗期间每周测量一到两次。对于所有实验，每周两次称重小鼠。研究包括以下几类：克唑替尼; 拓扑替康加环磷酰胺（拓扑/环）；和4）crizotinib + topo / cyclo。小鼠连续接受两种媒介物，克唑替尼，或克唑替尼加topo/环磷酰胺治疗。化疗药物的治疗时间表如下：治疗5天，停药16天，在第21天恢复周期。

　　导致小鼠安乐死的事件是疾病进展，定义为肿瘤体积达到初始体积的4倍或3 cm3。在针对SH-SY5Y和Felix-PDX肿瘤的生物学研究中，将小鼠以300 mm3的剂量入组，并随机分为上述相同的四个治疗组。将小鼠治疗3天，安乐死，并在最后一次治疗后4小时收集它们的肿瘤。所有动物工作均根据相关的国家和国际准则进行，并采取了措施以最大程度地减少肿瘤负担和与药物相关的副作用。所有动物研究均已获得费城IACUC儿童医院的批准（协议编号2012-5-643）。 对于Cell TiterGlo®药物组合实验，通过使用在上测量的发光检测测定法测量ATP的水平来评估体外细胞活力。在第1天将细胞以预定的接种密度铺板，然后在第2天24小时进行处理，然后在第5天72小时读取。首先使用单种试剂测试细胞，并针对每种试剂确定Dm值每个细胞系中的药物。然后将细胞铺板并用单一试剂和组合物处理，并分析结果。

　　还使用DIMSCAN分析进行了药物组合分析，DIMSCAN分析是一种基于半自动荧光的数字图像显微镜系统，可根据组织培养多孔板中选择性积聚和切割的双乙酸荧光素转化为荧光素的数量来定量活细胞。 DIMSCAN能够通过量化每孔的总荧光来测量4对数动态范围内的细胞毒性，该荧光与通过数字阈值法和曙红Y猝灭消除背景荧光后与活的克隆细胞数量成正比。简而言之，将细胞系接种在150μL完全培养基（每孔3000-14000个细胞）中的96孔板中，并孵育过夜。将50μL完全培养基中的克唑替尼，托泊替康和4-HC（环磷酰胺的活性代谢物）添加至孔中。将细胞系在这些单一试剂的存在下或组合下孵育96小时，然后将50μL0.5％曙红Y的荧光素二乙酸酯（终浓度荧光素二乙酸酯60μg/ mL）加入每个孔中，在37°C下再孵育25分钟。然后用DIMSCAN测量总荧光，结果表示为与暴露于赋形剂的对照细胞相比，经处理的细胞的存活分数。现在克唑替尼在哪里购买？更多详情可咨询下方微信。