索拉非尼/索拉菲尼可以显着抑制HepG2细胞的生长

　　从用含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂（Roche）的RIPA裂解缓冲液（CWBIO）裂解的细胞中提取总蛋白。使用二辛可宁酸测定法测量细胞裂解物的蛋白质浓度，并在上样前进行平衡。通过SDS-PAGE分离出总共30μg的蛋白质，并转移到聚偏二氟乙烯膜上。使用适当的抗体进行免疫印迹分析，并使用增强型化学发光检测试剂盒（Millipore）对条带进行可视化。4-6周大的雌性BALB / c无胸腺裸鼠购自中山大学实验动物中心。森大学（中国广州）。将小鼠保持在实验室中，用于特定的无病原体环境，层流气流条件，12小时明暗循环以及22°C至25°C的温度下进行动物实验。

　　所有动物均可免费获得标准实验室小鼠食物和水。按照中山大学生命伦理学委员会的批准进行动物实验，并按照既定的指导原则进行动物实验。为研究HCC细胞中TNF-α的生物学特性，我们用特异的shRNA敲低了SK中TNF-α的表达。 -HEP-1，我们加入40ng / mLTNF-α刺激HepG2细胞。结果表明，TNF-α刺激可以促进HCC细胞的增殖和迁移能力，而SK-HEP-1细胞中TNF-α的下调显着降低了HCC细胞的增殖和迁移。此外，当我们在SK-HEP-1-shTNF-α中添加外源性TNF-α时，其增殖和迁移能力得以恢复。为了确定TNF-α在介导HCC中索拉非尼耐药性中的作用，我们用不同剂量的索拉非尼处理HCC细胞48小时。 HepG2和SK-HEP-1细胞的IC50值分别为6.20μmol/L和12.83μmol/ L。但是，用TNF-α预处理的HepG2细胞的IC50值为8.12μmol/ L，而SK-HEP-1-shTNF-α细胞的IC50值为7.32μmol/ L。

　　此外，增殖试验表明，索拉非尼（索拉菲尼）剂量为6μmol/ L可以显着抑制HepG2细胞的生长，但是当用TNF-α刺激预处理HepG2细胞时，抑制效率大大降低。然而，索拉非尼仅显示出对SK-HEP-1细胞生长的轻度抑制，而它却明显抑制了SK-HEP-1-shTNF-α细胞的增殖能力。已经暗示EMT和索拉非尼耐药之间存在关联，并且大量证据表明TNF-α可以在不同的癌细胞中诱导EMT 。我们的结果还表明，TNF-α诱导了HCC细胞EMT标志物的典型变化。我们探索了索拉非尼对EMT的作用，我们发现索拉非尼减少了HepG2细胞中的蜗牛和波形蛋白，并提高了E-钙粘着蛋白。但是，当将TNF-α预添加到HepG2细胞中时，索拉非尼逆转EMT的作用降低了。值得注意的是，我们的结果表明，索拉非尼对存在或不存在TNF-α的SK-HEP-1细胞中的EMT几乎没有影响。

　　此外，当用3、6和12μmol/L浓度的索拉非尼处理HCC细胞时，我们发现索拉非尼对两种HCC细胞系中的TNF-α表达几乎没有影响。用于治疗炎症相关疾病。先前的研究表明，乌司他丁抑制巨噬细胞和乳腺癌细胞中TNF-α的产生。在当前的研究中，肝癌细胞以不同浓度的乌司他丁培养48小时。蛋白质印迹结果表明，乌司他丁以剂量依赖性方式下调TNF-α表达。 ELISA法检测TNF-α表明，乌拉他汀800和1600U/mL可显着降低HCC细胞上清液中TNF-α的水平，而索拉非尼浓度为6和12μmol/ L时对TNF-α的分泌几乎没有影响。

　　我们进一步检查了乌司他丁对逆转HCC细胞EMT的作用。结果显示，当乌司他丁的浓度超过1600U/mL时，两种HCC细胞系中的上皮标记E-钙黏着蛋白均显着上调，而间充质标记则显着下调。此外，当我们使用浓度为1600U / mL的乌司他丁来下调HepG2和SK-HEP-1细胞中的TNF-α时，蛋白质印迹结果表明索拉非尼显着抑制了两种HCC细胞系中的EMT。由于我们显示了乌司他丁对TNF-α的下调可促进索拉非尼抑制HCC细胞中的EMT，因此我们推测。现在索拉非尼的效果也是非常不错的，更多详情可咨询下方微信。