EGFR激酶通路相关的卡马替尼capmatinib获得性耐药机制

　　为了确定卡马替尼耐药的替代存活途径，通过3'-mRNA测序筛选了EBC-1、EBC-CR1、-CR2和-CR3细胞的基因表达。首先，我们通过层次聚类分析了RTK相关基因的表达。RTK相关基因被分为几个簇，几乎20%的RTK相关基因在抗性细胞系中显着上调。根据3'mRNA测序结果，与亲本细胞系相比，EBC-CR1、-CR2和-CR3中METmRNA表达略有下降，EGFRmRNA表达增加。　

　　然后我们证实与耐药细胞系中的多个RTK相比，EGFR蛋白磷酸化增加，但观察到EGFR拷贝数没有变化。上调最多的基因是KIT和EFEMP1。尽管KITmRNA高度上调，但在磷酸化RTK阵列中未观察到KIT激活。相比之下，EGFR信号在mRNA和蛋白质水平上都被激活。此外，与EGFR结合的EFEMP1可以激活下游信号并最终增加EGFR信号。　　

　　这些结果表明EGFR信号通路可能是MET的替代通路。尽管在所有耐药细胞系中EGFR活化都增加了，但对阿法替尼的细胞活力测定表明，只有EBC-CR1对单独使用阿法替尼仍然敏感。有趣的是，卡马替尼抑制了EBC-1细胞中的EGFR激酶磷酸化。　　

　　为了确定EBC-CR1细胞系中EGFR通路激活的机制，我们测试了多种EGFR配体（包括表皮生长因子[EGF]、双调蛋白、上皮调节蛋白、转化生长因子-α和HBEGF）的表达，并观察到HBEGFEBC-CR1细胞中的表达升高。为了进一步探索HBEGF在EGFR激活中的作用，我们将外源性HBEGF添加到EBC-1和EBC-CR1细胞系中，发现HBEGF足以挽救MET依赖性NSCLC细胞系EBC-1中的MET抑制。　　

　　在EBC-CR1中，含有HBEGF的培养物比没有配体的培养物更能抵抗EGFR抑制（p<0.01）。与亲代细胞系不同，尽管MET激酶持续激活，但阿法替尼的单次治疗可有效抑制EGFR、AKT和ERK1/2的磷酸化。因此，EGFR激活高度依赖于HBEGF作为EBC-CR1细胞中的主要存活信号。capmatinib详情请扫码咨询：