雷德帕斯(Midostaurin)脉冲暴露后细胞内药物的积累和保留

　　小分子酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 已成为治疗多种恶性肿瘤的有价值的治疗工具。抑制组成型激活的酪氨酸激酶会在转化细胞中诱导细胞凋亡，尽管它们的正常对应物基本上不受影响。人们普遍认为，持续的靶标抑制是 TKI 有效细胞毒活性的先决条件。最近，几个研究小组已经证明，BCR-ABL转化的细胞可以通过长时间的细胞内药物积累和高剂量 TKI 脉冲暴露而发生细胞凋亡。这表明给定的 TKI 可能仍以活性浓度存在于靶细胞中，尽管该药物已从患者血浆中清除。我们的团队率先使用直接药物检测和功能读数测量细胞内 TKI 积累。我们建议 TKI 的细胞内蓄积潜力是一种重要的药理特性，可以进行系统测试。我们进一步建议，在未来的临床试验中测试不同的给药策略时，应考虑细胞内 TKI 蓄积潜力。

　　在急性髓性白血病 (AML) 中，约 30-35% 的患者存在激活的FLT3突变。最常见的突变类型由通常位于近膜结构域或酪氨酸激酶结构域 1 内的内部串联重复 (FLT3-ITD)表示。FLT3-ITD 导致组成性激活的细胞内信号传导，导致恶性转化。目前有几种 FLT3-TKI 处于临床开发阶段，证明了作为单一疗法的短期生物学和临床活性。据报道，索拉非尼与标准化疗联合使用可改善年龄 <60 岁未选择的 AML 患者的无事件生存率，最近的报告强调了雷德帕斯（Midostaurin）联合标准化疗在FLT3突变的 AML 中的疗效。雷德帕斯（Midostaurin）是一种星形孢菌素的多激酶抑制剂衍生物，对多种激酶显示活性，包括 FLT3、KIT、PKC 酶家族的几个成员、KDR 和 PDGFR-β。最近报告的一项国际、随机、安慰剂对照的 III 期临床试验 (RATIFY) 的结果惊人地表明，新诊断的FLT3突变 AML 治疗的18-60 岁成人的总体和无事件生存率显着增加，并且具有临床相关性除标准化疗外，还使用雷德帕斯（Midostaurin）。这种生存获益可能会导致在不久的将来批准雷德帕斯（Midostaurin）用于治疗FLT3突变的 AML。

　　为了研究高剂量雷德帕斯（Midostaurin）脉冲处理的效果，我们检查了在造血小鼠Ba / F3细胞（DSMZ，不伦瑞克，德国）与突变体稳定转染的细胞凋亡性细胞死亡的诱导FLT3-ITD（的Ba / F3-FLT3-ITD） .为了排除细胞环境特异性现象，在表达人骨髓单核细胞 MV4-11 白血病细胞（DSMZ，Braunschweig，德国）的突变 FLT3-ITD 中进行了类似的实验。细胞用雷德帕斯（Midostaurin）的不同生物学相关浓度处理2小时（即，35，100和3500纳米），中描述充分洗涤，然后在不含 TKI 的细胞培养基中保持 24 小时。未处理的细胞和用上述浓度的雷德帕斯（Midostaurin）连续处理的细胞作为对照。使用 3500 nM midostaurin 对 Ba/F3-FLT3-ITD 细胞进行高剂量脉冲暴露（2 小时）导致在 24 小时时>80% 的细胞凋亡，而相比之下，分别使用 35 和 100 nM midostaurin 处理 2 小时，没有增加细胞凋亡水平。通过使用 Ba/F3-FLT3 野生型细胞作为对照，排除了由midostaurin 的脱靶活性介导的影响。在此对照设置中，在任何测试的雷德帕斯（Midostaurin）浓度下脉冲暴露 2 小时后，均未检测到细胞凋亡增加（数据未显示）。有趣的是，Ba/F3-FLT3-ITD 细胞中的半胱天冬酶 3 裂解动力学在所使用的不同 midostaurin 浓度下是相似的，这表明在暴露于低或高 midostaurin 浓度的细胞中运行的细胞凋亡诱导的共同特定机制，从而证实了先前的发现用 BCR-ABL TKI 获得。

　　总之，这些数据证明了高剂量脉冲暴露后的细胞内midostaurin积累，随后随着时间的推移缓慢释放到细胞外介质中，其方式类似于BCR-ABL TKI所描述的方式。

　　从临床角度来看，我们的研究结果可能证明对治疗性 TKI 给药方案的未来开发有用：用于临床开发的 TKI 先导化合物的选择通常基于药效学和药代动力学特征。最近，公布的数据表明，给定化合物的血浆半衰期短不一定能预测临床实用性方面的不足。我们的高剂量 雷德帕斯（Midostaurin）脉冲治疗体外模型揭示了细胞外和细胞内雷德帕斯（Midostaurin）浓度之间的紧密相互作用。此处提供的数据与 TKI在体内的细胞内积累和保留模型一致与细胞外培养基相比，转化为显着更高的细胞内 TKI 浓度。可以想象，在高剂量脉冲暴露的情况下，这可能会导致细胞内 TKI 暴露时间延长，显着超过 TKI 的血浆半衰期，例如在使用达沙替尼的临床试验中观察到的情况。在最近的临床试验中测试雷德帕斯（Midostaurin）联合标准化疗治疗 AML (RATIFY)，每天两次以 50 毫克的剂量给予雷德帕斯（Midostaurin）。考虑到此处提供的数据，可能值得考虑研究替代给药方案，模拟此处描述的高剂量脉冲暴露设置，每天仅给药一次。这种临床试验需要与密切的临床、药代动力学和药效学监测并行，以彻底评估安全性和有效性。正如达沙替尼所见，高剂量脉冲治疗可能在副作用方面具有优势，最突出的是在患者对处方药物的依从性方面。无论如何，因为不能排除在高剂量脉冲治疗中更频繁地发生不想要的和潜在的严重副作用，例如 QT 间期延长，这种治疗方案的急性和慢性毒性必须在临床试验中进行彻底评估。总之，我们的数据为 AML 中 TKI 疗法的未来发展奠定了新的基石：我们建议分析血浆和细胞内的药代动力学，以优化即将进行的 TKI 临床试验中的给药方案。微信扫描下方二维码了解更多：