对达拉非尼(dabrafenib)耐药的表型特征

　　在本研究中，研究了对达拉非尼（dabrafenib）（一种 B-RAF 抑制剂）耐药的黑色素瘤细胞的表型，以进一步了解黑色素瘤对 B-RAF 抑制的耐药性。使用 3 种不同的细胞系 A375、397 和 624.38 产生对达拉非尼具有抗性的黑色素瘤细胞，所有细胞系均携带 B-RAFV600E，并通过细胞荧光分析、Ion Torrent 技术、免疫荧光和生物化学进行表征。所有 dabrafenib 耐药细胞除了 MAPK 信号的重新激活外，还表现出与其敏感对应物相比的形态变化，伴随着 CD90（间充质标记）表达的增加和 E-钙粘蛋白（上皮标记）表达的减少，表明上皮-间充质样表型转变。

　　然而，与非 TGF-β1 诱导的 EMT 黑色素瘤细胞中观察到的敏感性相比，具有 TGF-β1 诱导的上皮间质转化 (EMT) 的黑色素瘤细胞对达拉非尼治疗更敏感，这表明 TGF-β1 诱导的EMT 与达拉非尼耐药无关。尽管 dabrafenib 抗性细胞表现出增加的细胞运动性和 E-cadherin/波形蛋白重组，正如在 EMT 中所预期的那样，但它们都显示出不变的 E-cadherin mRNA 和不变的 Snail 蛋白水平，而 Twist1 蛋白表达降低，但 A375抗性黑色素瘤细胞，在那里它不受影响。这些发现表明黑色素瘤细胞在药物暴露下采用了一种独特的活性 EMT 样过程。此外，dabrafenib 抗性细胞表现出干细胞样特征，Oct4 从细胞质易位到核周位点和细胞核，并增加 CD20 表达。

　　黑色素瘤是最致命的皮肤癌形式，占皮肤癌相关死亡人数的 75% 以上。在本研究中，我们表征了对达拉非尼耐药的黑色素瘤细胞的表型。为此，我们从 3 种不同的达拉非尼（dabrafenib）敏感黑色素瘤细胞系（A375、397 和 624.38）中选择了对 dabrafenib [B-RAF 抑制剂 (B-RAFi)] 具有抗性的体外黑色素瘤细胞，并在 dabrafenib-耐药和敏感的黑色素瘤细胞，在药物选择压力下，因为黑色素瘤中对 B-RAFV600E抑制的抵抗是可逆的和适应性的。

　　黑色素瘤生物学知识的进步导致了所谓的“靶向疗法”的发展，例如分别针对 B-RAFV600E和 MEK 蛋白的达拉非尼和曲美替尼。然而，由于替代生长控制途径的激活而产生的耐药性仍然是用此类化合物治疗黑色素瘤的关键问题，尽管新兴的计算模型概念在预测治疗反应方面取得了长足进步。

　　在本研究中，我们观察到 3 种不同的黑色素瘤细胞系，均来自 MM 患者并携带 B-RAFV600E突变，含有一些能够在用达拉非尼 (B-RAFi) 治疗后增殖的细胞，表明黑色素瘤的存在能够逃避药物作用并负责黑色素瘤进展的细胞。我们发现所有 dabrafenib 抗性细胞都重新激活了 MAPK 信号传导，并且与药物敏感的对应物相比，呈现出更细长的形状，伪足形成和细胞间空间增加。值得注意的是，这些形态变化伴随着 CD90 表达的增加，CD90 是一种间充质标志物，上皮标志物 E-cadherin 的表达降低，表明 dabrafenib 抗性黑色素瘤细胞的间充质特征。这一发现得到了在耐药细胞核周位点检测波形蛋白的进一步支持，而在对药物敏感的黑色素瘤细胞的细胞质中也观察到了波形蛋白。

　　此外，所有 dabrafenib 抗性黑色素瘤细胞显示出比 dabrafenib 敏感细胞更高的细胞运动性，表明这些细胞的上皮-间充质表型转变。然而，被认为是真正的经典 EMT 诱导剂的 E-cadherin 的下调并未被检测到，表明黑色素瘤细胞经历了上皮-间充质样转变或病理性 EMT。这一发现得到了 TGF-β1 诱导的 EMT 与达拉非尼耐药性无关的观察结果的进一步支持。

　　我们得出结论，黑色素瘤对达拉非尼（dabrafenib）的耐药性与 MAPK 信号重新激活相关，伴随着上皮-间充质样表型转变以及干细胞样表型特征的获得，这可能有助于解释细胞继续生存的能力在药物条件下增殖。微信扫描下方二维码了解更多：