奥希替尼2020年价格贵吗?这是很多患者都很关心的问题,奥希替尼是一款很受关注的药品,为什么这么受欢迎呢?我们先来看下奥希替尼的效果。
奥希替尼对ABCB1过表达细胞系ABCB1底物的影响
进行了细胞毒性试验,以选择奥希替尼的无毒药物浓度。浓度的0.3,0.5,和1.0μM,为进一步的实验选择没有明显的细胞毒性。为了确定奥希替尼对abcb1过表达的人类癌细胞中abcb1介导的MDR的逆转作用,我们采用亲本k1-3细胞系和药物选择性k1-c2细胞系,分别在奥希替尼存在和不存在的情况下进行了细胞生存检测。奥希替尼在1.0°M时并没有显著改变亲代kb-3细胞对药物的敏感性。然而,在KB-C2细胞中,奥希替尼对紫杉醇、秋水仙碱和长春新碱的抗性呈浓度依赖性显著下降。与此相反,奥希替尼在1.0mol/l时并没有显著增加顺铂的细胞毒性,而顺铂不是ABCB1转运体的底物。这一逆转效应与维拉帕米在3.0的氧化石墨烯含量或zosuquidar在0.3的氧化石墨烯含量相似。
此外,我们使用转染ABCB1的细胞系HEK/ABCB1和亲本细胞系HEK293/pcDNA3.1将这些因子限制在只有一个由ABCB1调控的因子。同样,奥希替尼,在0.3、0.5和1.0时,abcb1介导的对紫杉醇和长春新碱的抗性呈浓度依赖性下降。然而,奥希替尼在1.0时,并没有显著改变空载体转染HEK293/pcDNA3.1细胞的敏感性。我们也使用维拉帕米和zosuquidar作为阳性对照,我们也得到了相似的结果。这些结果表明,奥希替尼可以显著逆转abcb1介导的MDR。
奥希替尼对ABCG2、ABCC1、ABCC10过表达细胞系的影响
为了确定奥希替尼对abcg2过表达的人癌细胞中abcg2介导的MDR的逆转作用,我们使用亲本NCI-H460细胞系和药物选择性NCI-H460/MX20细胞系。我们发现,在NCI-H460/MX20过表达ABCG2细胞中,奥希替尼在0.3华氏度M时,可以显著降低mitoxantrone的耐药性。然而,奥希替尼并没有使亲代NCI-H460细胞对米托蒽醌敏感。
此外,我们还分析了奥希替尼对ABCC1-和abcc10介导的MDR的影响。我们发现,奥希替尼在0.3mol/l时对ABCC1过表达HEK/ABCC1细胞和ABCC10过表达HEK/ABCC10细胞中ABCC1和ABCC10介导的MDR没有显著的逆转作用。
这些结果表明,奥希替尼可以逆转ABCB1和abcg2介导的MDR,但不能逆转ABCC1和abcc10介导的MDR。
奥希替尼对细胞内[3H]-紫杉醇积累的影响
为了研究逆转机制,我们研究了奥希替尼对ABCB1过表达细胞内[3H]-紫杉醇积累的影响。我们发现,奥希替尼在0.3和3.0°M时,KB-C2细胞中[3H]-紫杉醇的细胞内积累显著增加,而奥希替尼并没有改变亲代KB-3-1细胞中[3H]-紫杉醇的细胞内积累。其效果与已知的ABCB1抑制剂zosuquidar(3多酚M)相当。这些结果表明,奥希替尼显著增加了abcb1过表达细胞的化疗药物的细胞内浓度,并增加了这些MDR细胞的细胞毒性。
奥希替尼对[3H]-紫杉醇外排的影响
我们检测了在ABCB1过表达细胞中[3H]-紫杉醇在加入或不加入奥希替尼时在不同时间点的流出,以确定由奥希替尼引起的细胞内[3H]-紫杉醇积累的增加是否是由于抑制[3H]-紫杉醇流出所致。在培养基中去除[3H]-紫杉醇后,药物选择性KB-C2和亲代kb-3细胞中出现[3H]-紫杉醇外排。在流出2h结束时,KB-3-1细胞内正常化[3H]-紫杉醇损失19.6%。同时,KB-C2细胞中发现正常化[3H]-紫杉醇积累损失超过67.0%。奥希替尼或ABCB1抑制剂zosuquidar可增加ABCB1过表达细胞中[3H]-紫杉醇的保留。奥希替尼的作用遵循浓度依赖的模式,3.0°M奥希替尼在KB-C2细胞中表现出70.7%的[3H]-紫杉醇保留。奥希替尼和zosuquidar均未显著改变亲代KB-3-1细胞的外流模式。
奥希替尼对ABCB1蛋白表达及位置的影响
ABCB1介导的MDR的逆转可以通过降低ABCB1在细胞表面的表达或抑制ABCB1转运体的功能来实现。分析种代号为ABCB1的奥希替尼对表达的影响,我们进行了免疫印迹分析KB-3-1细胞和KB-C2细胞孵化为3.0μM奥希替尼0,24、48和72h。我们发现种代号为ABCB1的没有明显的表达变化在奥希替尼治疗。分析如果奥希替尼导致一种代号为ABCB1的易位的质膜的细胞质中,我们执行一个免疫荧光分析孵化KB-C2细胞为3.0μM奥希替尼0,24、48和72h。结果表明,膜种代号为ABCB1的表达和位置没有显著改变。
md稳定奥希替尼-ABCB1复合物的相互作用分析
为了研究相互作用的动力学性质,我们对ABCB1与奥希替尼进行了10ns的分子动力学模拟。首先将所有蛋白质框架在参考框架主链上对齐,然后计算均方根偏差(RMSD)。监测蛋白质的RMSD可以表明模拟是否达到了平衡。复合物中蛋白质的主链在前4ns中偏离了6.5A左右,之后它获得了几乎稳定的构象,并一直持续到模拟期结束。奥希替尼(泰瑞沙)在模拟1ns后稳定,RMSD高达1.5a,表明在绑定袋内有小的内部波动。ABCB1和奥希替尼之间的疏水相互作用涉及残基Met69、Phe72、Phe303、Phe728、Tyr950、Phe983和Ala987。在模拟过程中,Phe72的苯环与奥希替尼的1-甲基吲哚环发生了半空相互作用,超过50%的时间。同样的,Phe728与奥希替尼的二甲胺氮原子之间形成了一个“杂正离子”相互作用。模拟后发现奥希替尼与残基Gln725和Gln990之间存在氢键和极性相互作用。
奥希替尼对ABCB1ATP水解的影响
ABCB1转运体利用ATP水解产生的能量,以浓度梯度将底物排出细胞膜,因此ATP消耗反映了其ATP酶活性。为了评估奥希替尼对ABCB1ATP酶活性的影响,我们测量了不同浓度奥希替尼存在时ABCB1介导的ATP水解。与其他TKIs相似,奥希替尼刺激ABCB1的atp酶活性的方式是浓度依赖性的,最大刺激是基础活性的2.61倍。要获得50%的刺激,奥希替尼的浓度为1.28×M。结果表明,奥希替尼在药物底物结合位点相互作用,影响ABCB1的atp酶活性。
奥希替尼2020年价格是多少呢?奥希替尼很多厂家都有生产的,不同的厂家的价格是不一样的,目前性价比较高的是老挝的,老挝东盟和老挝第二药厂的奥希替尼都是很不错的选择,具体的价格可以咨询康安途,详情请扫码咨询:
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