Sclc的一个亚群对维奈托克(威托克)过敏是第一类bcl-2选择性抑制剂,最近fda批准用于至少接受过一次治疗的17p缺失的B细胞慢性淋巴性白血病(cll)患者。基于其安全性和有效的抗癌活性,我们对多种癌症类型的维奈托克(威托克)进行了高通量筛选,目的是识别其他可能对维奈托克(威托克)有反应的癌症。我们筛选了950多个细胞系,包括791个来源于实体瘤的细胞系。
在实体肿瘤细胞系中,神经母细胞瘤(mycn-amplified)和巩膜细胞对维奈托克(威托克)特别敏感。延长5天和7天的处理时间并不改变不同的巩膜细胞系对胶原纤维的敏感性。此外,还观察到高bcl-2nci-h187(auc=0.965)细胞株对维奈托克(威托克)的明显剂量反应。相反,低bcl-2nci-h524(auc=0.987)直到最大剂量。由于巩膜对初始铂类化疗敏感,我们以1:1.5比例检测了含顺铂的维尼托克拉斯。在这里,我们发现了一些弱协同作用,在较高浓度的化疗,在四个六线在不同的维奈托克(威托克)浓度。
这些数据表明这种临床复合物具有潜在的新的适应症,敏感的巩膜以高bcl-2表达区分,我们接下来探讨bcl-2的表达水平是否可以预测巩膜内的反应。通过gdsc数据库,在56株筛选出的sclc细胞系中,有52株bcl-2的rna表达水平正常。我们发现对维奈托克(威托克)的敏感性与bcl-2表达呈正相关。与此相反,其他主要bcl-2成员,包括bcl2l11(bim)的mrna和蛋白表达谱,并不能进一步预测敏感性。虽然大规模药物筛选研究表明,目标表达并不一致预测药物反应,这些数据表明,bcl-2单独可能构成一个有效的预测标志物维奈托克(威托克)在巩膜,高bcl-2表达巩膜产生更好的反应。
Bcl-2的甲基化有助于其表达,我们接下来评价bcl-2在巩膜上的表达与其他癌症相比,以确认先前的发现bcl-2在巩膜上的表达普遍较高,提示存在对bcl-2的潜在依赖性。我们利用gdsc和癌细胞百科全书(ccle)资源的bcl2mrna表达数据,确实发现sclc细胞系平均比其他实体瘤细胞系(包括nsclc。接下来我们要问,这种关系是否适用于患者的肿瘤。
由于现有肿瘤标志物的局限性,在小细胞肺癌肿瘤中的生物标志物评价具有挑战性。我们鉴定了2个数据集与sclc肿瘤的基因表达相关,发现bcl-2在sclc肿瘤中的表达明显高于非小细胞肺癌。这些数据证实bcl2在sclc细胞系和肿瘤的实质亚群中表达较高。由于bcl-2在sclc中被扩增,我们探讨了是否只有dna扩增才能增加bcl-2的表达。我们发现bcl2扩增确实与bcl2表达相关。然而,我们注意到bcl2rna水平在每个拷贝数类别中差异很大。Bcl2基因在转录起始位点(tss)上游有一个cpg岛。
鉴于cpg岛经常参与基因表达的调控,我们因此提出dna甲基化是否可能在bcl-2的表达中发挥作用。利用gdsc得到的甲基化数据,我们发现2和3-bcl2拷贝数细胞系在cpg岛上都有不同程度的甲基化,bcl-2表达较低的细胞有较高的甲基化。这些结果表明bcl-2表达的表观调控在sclc中起着重要作用,与bcl2拷贝数无关。Pi/annexincy5染色的sclc细胞的facs分析表明,1m贴壁菌处理72h后,高bcl-2表达的nci-h510a和dms-53细胞发生明显凋亡,相应的活细胞在同一处理时间内明显减少。
相反,在相同的72小时处理中,贴壁抗性细胞系没有显著的凋亡增加。重要的是,在这些测定中使用的浓度是临床相关的,基于用维奈托克(威托克)观察到的稳态药代动力学。用1m维奈托克(威托克)处理的nci-h510a和dms-53全细胞裂解物中的bim的免疫沉淀法,通过分离的bim:bcl-2复合物判断出维奈托克(威托克)的靶向活性。与过去的报告一致,维奈托克(威托克)导致增加bim:mcl-1复合物,我们也注意到增加bim:bcl-xl复合物。Bim击倒降低了nci-h510a和dms-53细胞的维奈托克(威托克)疗效,进一步显示了以bim介导的方式杀死维奈托克(威托克)细胞。
这些数据表明,贴壁粘附剂通过破坏bim:bcl-2复合物对巩膜细胞的靶向杀伤作用,导致bim依赖性的凋亡。贴壁粘附剂对高表达bcl-2的小鼠模型具有明显的杀伤作用。治疗100毫克/千克贴面粘土菌每天一次导致肿瘤明显缩小。这些小鼠的体重几乎没有减轻,也没有其他明显的中毒症状。与我们的假设一致,低bcl-2异种移植模型nci-h82对维奈托克(威托克)处理无反应。
我们将我们的分析扩展到三个病人来源的异种移植物(pdxs),通过westernblot分析所示,包括化学分析仪86型。使用相同的治疗方案,我们发现这些肿瘤均对维奈托克(威托克)敏感,在lu5263pdx模型中有显著的回归,在lu86和lu95模型中有近全生长抑制。用维奈托克(威托克)治疗3天的lu5263肿瘤细胞分析显示有明显的凋亡,与维奈托克(威托克)的活性方式一致。此外,在体内的lu5263肿瘤中观察到bim:bcl-2复合物破坏的体外机制,包括bim:bcl-xl复合物明显增加。维奈托克(威托克)在老挝东盟药厂就可以买到,详情请扫码咨询:
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