吡非尼酮pirfenidone对甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞的抗纤维化作用

　　目的：探讨吡非尼酮对甲状腺相关眼病（TAO）患者眼眶成纤维细胞（OFs）的影响及其机制。方法：分离TAO患者的OFs并在DMEM中培养。细胞分为四组，分别用0、250、500和1000μg/ml吡非尼酮处理24、48或72小时。四甲基偶氮盐（MTT）法检测细胞增殖，台盼蓝测定细胞活力。转化生长因子(TGF)β1mRNA水平通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)确定。酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养细胞分泌的Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白。　　

　　结果：(1)原代培养的OFs具有典型的成纤维细胞纺锤形形态。(2)MTT法显示吡非尼酮处理以剂量依赖性方式显着抑制OFs的增殖(P<0.05)，吡非尼酮处理组的增殖率为-15.31%、-24.92%、-48.53%，分别为250、500,72h后分别为1000μg/ml，其中1000μg/ml吡非尼酮的抑制作用与其他两个处理组有显着差异（P<0.05）。　　

　　24h、48h、72h不同时间点同浓度组抑制作用差异无统计学意义（P>0.05）。显示0,250、500、1000μg/ml不同浓度吡非尼酮的OFs在72h的存活率分别为78.37%、79.21%、78.24%和76.28%。各药物治疗组与对照组无显着差异（P>0.05）。(3)RT-qPCR结果显示，250、500、1000μg/ml吡非尼酮处理组72hTGFβ1mRNA表达水平分别为0.760±0.010、0.440±0.006和0.290±0.002。与对照组比较（0.950±0.014），差异有统计学意义（均P<0.05）。此外，1000μg/ml吡非尼酮治疗组TGFβ1mRNA表达水平显着低于其他两个治疗组（均P<0.05）。　　

　　250、1μg/000000000μg/1μg/1μg组的Ⅰ型胶原蛋白（0.633±0.006、0.527±0.003和0.402±0.008）和Ⅲ型胶原蛋白（0.511±0.003、0.439±0.007和0.223±0.006）的分泌量72h显着低于对照组（0.794±0.005、0.527±0.007，均P<0.05）。1000μg/ml吡非尼酮治疗组Ⅰ型和Ⅲ型胶原分泌量显着低于其他两组（P<0.05）。　　

　　结论：吡非尼酮抑制OFs的细胞增殖、TGFβ1表达和胶原分泌，这可能有助于吡非尼酮pirfenidone的抗纤维化作用。详情请扫码咨询：