卡马替尼Capmatinib减少HGF诱导的体外增殖

　　卡马替尼抑制HGF刺激c-MET磷酸化和下游通路激活　　

　　与先前的发现类似，我们表明，三个卵巢癌细胞系SKOV3，OVCAR3和CAOV3，表达在基线条件下磷酸化的c-Met的低水平。加入40ng/mLHGF后c-MET磷酸化增加，而用卡马替尼处理至少在治疗后360分钟内抑制HGF诱导的c-MET磷酸化。类似地，尽管添加HGF导致AKT和ERK1/2磷酸化，但用卡马替尼处理后，这种活化作用降低了，表明c-MET下游途径PI3K和ERK/MAPK受到抑制。　　

　　HGF对c-MET磷酸化的刺激持续长达48小时，并在24和48小时后处理表明，卡马替尼在长达48小时的时间内降低了HGF刺激的c-MET磷酸化。在HOSE6.3细胞（永生化的正常人卵巢表面上皮细胞）中，基线磷酸c-MET较低，但随着HGF的添加而增加，并因卡马替尼处理而被废除。　　

　　卡马替尼减少HGF诱导的体外增殖　　

　　为了研究卡马替尼抑制c-MET的细胞增殖作用，我们用HGF，HGF+卡马替尼和卡马替尼处理了未经处理的OVCAR3，SKOV3和CaOV3癌细胞以及正常卵巢表面上皮HOSE6.3细胞的增殖率。在处理后3-5天，用HGF处理的OVCAR3，SKOV3和HOSE6.3细胞中观察到了增殖的轻微增加（无统计学意义），并通过添加卡马替尼来消除。相对于未处理的细胞，单独的卡马替尼对体外增殖没有统计学上的显着影响。　　

　　卡马替尼抑制HGF刺激的趋化诱导的和随机迁移　　

　　尽管卵巢癌不会通过传统的内插/外扩方法扩散，但运动能力仍然是转移的关键方面。为了检查卡马替尼改变HGF刺激的细胞迁移的能力，我们使用了两种不同的分析方法来评估趋化诱导的迁移（Boyden室）和随机迁移（即非趋化性；基于细胞的基质）。如预期的那样，在博登室试验中添加HGF显着增加了向血清迁移的细胞数量，而同时添加HGF和卡马替尼则使迁移回到未刺激的水平。　　

　　已证明许多被HGF影响的信号通路取决于细胞-基质相互作用以及暴露于3D或细胞外基质的细胞的变化。虽然腹膜表面本身是二维的，但我们使用细胞衍生的基质（CDM）在体内环境中更紧密地概括了细胞-基质的相互作用，并研究了卵巢癌细胞的随机迁移。尽管在测试条件下OVCAR3和CaOV3细胞不能充分运动，但SKOV3细胞在加入HGF的情况下在26小时内显着延长了路径长度，而卡马替尼的共同添加返回了路径长度，位移和持久性与未经处理的细胞相比。　　

　　卡马替尼抑制离体腹膜粘连　　

　　卵巢癌的恶毒行为之一是其与腹膜表面的粘附以及随后的侵袭/定植以形成遍及整个腹膜腔的广泛转移。为了解决HGF和卡马替尼影响卵巢癌细胞粘附腹膜的能力，我们使用从小鼠腹膜中取出的重要组织进行了离体粘附测定。HGF使OVCAR3和SKOV3细胞的腹膜粘附增加约2倍，而用卡马替尼（Capmatinib）处理则消除了这种作用。CaOV3细胞未包括在该检测中，因为它们在检测持续时间内侵入了腹膜，因此无法进行成像和定量。详情请扫码咨询: