丙肝病毒复制的调制PKR取决于NF-κB介导干扰素反应

　　背景：　　

　　在丙肝感染过程中，外周血单核细胞的激活状态及其对丙肝复制的影响尚不清楚。我们推测，与丙肝单感染患者相比，HIV-丙肝合并感染患者外周血单核细胞的修饰活化可能导致不同的丙肝复制单核细胞贮存库。　　

　　方法：　　

　　我们对合并和不合并艾滋病毒的丙肝感染患者进行了病例对照分析。在外周血单核细胞(PBMCs)，外周血淋巴细胞(人外周血)和外周血单核细胞从丙肝病毒分离monoinfected和HIV-丙肝合并感染患者中，细胞内的丙肝病毒负荷和标记的细胞激活，核factor-kappaB(NF-κB)激活，量化使用细胞内检测丙肝-core蛋白质和电泳迁移率改变分析，分别。　　

　　结果：　　

　　从HIV-丙肝合并感染患者中分离出的单核细胞中丙肝的胞内载量高于单核感染患者。在从HIV-丙肝合并感染患者分离的PBMCs中，单核细胞内丙肝载量高于PBLs。细胞激活以NF-κB激活更高在单核细胞分离HIV-丙肝合并感染患者比monoinfected患者。　　

　　结论：　　

　　我们的结果表明，外周血单核细胞是HIV-丙肝合并感染患者肝外重要的丙肝贮存库，并表明了HIV-丙肝合并感染患者单核细胞激活状态与丙肝贮存库大小之间的潜在关联。　　

　　丙型肝炎病毒(丙肝)是属于黄病毒的一种正链RNA病毒，是非a非b型肝炎的肠外传播的主要病原。目前，大约3%的世界人口感染了丙肝病毒，而且这些数字似乎还在增加。丙肝感染最显著的特征之一是超过85%的急性感染患者成为慢性感染。因此，在大多数感染患者中，丙肝持续不确定，导致慢性肝炎、肝硬化和型肝细胞癌。此外，在发达国家，大约三分之一的艾滋病毒感染者中存在丙肝病毒。慢性丙型肝炎的加速发展和使用联合抗逆转录病毒疗法(HAART)使艾滋病毒感染者的预期寿命增加，导致了型艾滋病毒-丙肝合并感染患者因丙肝而住院和死亡的增加。一些报告发现丙肝合并感染与HIV疾病进展之间存在关联，而HIV感染也被报道加速了严重肝病的发展。　　

　　丙肝最初被认为是一种严格意义上的嗜肝病毒，但越来越多的证据表明它也可以在外周血单核细胞(PBMCs)中复制，特别是在HIV感染的患者中。据报道，感染细胞中含有丙肝负链RNA，这是一种病毒复制的中间体，病毒基因组序列常被发现与血清和肝脏中发现的不同。此外，也有报道称，包括人T、b细胞系、PBMCs、外周血淋巴细胞(PBLs)和单核细胞/巨噬细胞在内的几种细胞在体外和体外外周血分离细胞中能够支持丙肝感染。此外，在感染的黑猩猩体内和体外均发现一些病毒株是淋巴性的。丙肝复制出现在严重联合免疫缺陷小鼠的造血细胞中，以及在肝移植后(而非之前)的患者的PBMCs中。因此，免疫抑制可促进丙肝的肝外复制。　

　　我们报告，在HIV-丙肝合并感染患者外周血单核细胞是主要的丙肝病毒和显示肝外细胞水库增加了NF-κB相比，激活单核细胞分离monoinfected病人。　　

　　我们观察到从HIV-丙肝合并感染患者中分离出的单核细胞与从单感染患者中分离出的单核细胞相比，细胞内丙肝负荷更高。更高的NF-κB激活单核细胞的测量HIV-丙肝合并感染患者相比，单核细胞与丙肝病毒monoinfected隔离病人。我们的结果强调了外周血单核细胞是HIV-丙肝合并感染患者肝外重要的丙肝蓄水池，并提示单核细胞的激活可能参与丙肝蓄水池的形成。　　

　　在我们的研究中，我们观察到单感染和合并感染患者的血浆丙肝负荷水平相似。考虑到hiv感染者的CD4细胞计数的正常水平，这个结果并不令人惊讶。然而，除了血浆病毒载量外，检测外周血细胞亚群中丙肝感染是重要的，并能区分丙肝单发感染者和HIV-丙肝合并感染者之间的实质性差异。毫无疑问，丙肝病毒主要在肝脏复制，但肝外复制位点的存在仍有争议。这一证据受到质疑，因为通常使用的技术在区分正股和负股的能力上是有限的。在一些早期的研究中，使用优化了链特异性的分析方法，丙肝阴性链RNA未在感染患者的PBMCs中检测到。相比之下，其他人最近报道了在PBMCs、中比较常见的丙肝负链RNA的检测。　　

　　我们采用丙肝核心抗原ELISA检测，因为有报道称，在所有病例中，通过使用核心抗原或RNA浓度监测丙肝感染患者进行抗病毒联合治疗后，其病毒动力学曲线都非常相似。此外，ELISA检测的丙肝核心抗原是细胞内病毒，而不是细胞结合病毒，因为在接受或不接受胰蛋白酶治疗的丙肝感染患者的单核细胞中检测到相似水平的丙肝核心抗原(数据未显示)。我们只在单感染和合并感染的患者的PBMCs中检测到非常低的丙肝。因此，我们决定评估丙肝在PBMC亚群，即外周血单核细胞和PBLs中的存在。我们主要观察到丙肝存在于外周血单核细胞中，而几乎不在从HIV-丙肝合并感染患者分离的PBLs中。与我们的数据相一致的是，在含有复制丙肝的细胞中，单核细胞/巨噬细胞之前已经被报道可能是bb0的主要细胞靶点之一。尽管单核细胞的丙肝感染在单感染和共感染患者中都持续观察到，但我们在共感染患者的单核细胞中检测到了最高数量的丙肝。这可能表明，艾滋病毒感染有利于丙肝在合并感染患者单核细胞的复制，甚至在haart治疗患者的血浆艾滋病毒载量检测不到。　　

　　旁边的优惠分布丙肝病毒合并感染患者单核细胞，我们观察到更高水平的NF-κB相比，合并感染患者单核细胞活化的单核细胞monoinfected病人。NF-κB激活增加艾滋病毒感染t细胞和单核细胞/巨噬细胞和支持hiv-1复制。hiv-1的蛋白质，如Nef、冲程体积和乙刺激NF-κB通过RelA/p50规范化途径激活单核细胞/巨噬细胞和t细胞，分别。我们和其他团队最近报道说，hiv-1Nef和丙肝病毒核心蛋白刺激另外NF-κB激活和支持hiv-1复制在单核细胞/巨噬细胞和肝纤维发生。我们的研究结果表明，高水平的NF-κB激活单核细胞中观察到的高细胞内丙肝病毒合并感染患者伴随的负载。我们还观察到，与健康受试者相比，丙肝感染患者单核细胞中HLA-DR激活标记物的水平最高(数据未显示)，表明HLA-DR标记物可能用于丙肝感染和/或合并感染患者外周血细胞的激活标记物。此外，先天免疫激活标志物，如可溶性CD14，预测在HIV-丙肝合并感染期间，宿主对基于干扰素的丙肝治疗反应不良。虽然HIV-丙肝合并感染患者单核细胞内丙肝载量增强，但HIV是否通过免疫抑制直接或间接促进丙肝感染尚不清楚。我们的研究是对有限数量的患者进行概念验证的研究。未来的临床试验将旨在揭示丙肝在单核/巨噬细胞中复制的分子机制。　

　　在没有合并感染，丙肝病毒感染通常下调NF-κB激活直接通过病毒蛋白质如丙肝病毒核心或间接通过失活的小牛(线粒体抗病毒信号)蛋白。我们发现单核细胞与丙肝病毒monoinfected病人显示低水平的NF-κB相比，激活单核细胞分离HIV-丙肝合并感染患者。数项研究证实，在没有艾滋病毒感染的情况下，最优丙肝病毒的复制需要低水平的NF-κB激活。持续NF-κB激活已报道的主要因素的障碍丙肝病毒复制。丙肝激活dsrna依赖的eIF2a激酶PKR。有趣的是PKR沉默抑制NF-κBHuh7.5.1细胞激活，表明丙肝病毒复制的调制PKR取决于NF-κB介导干扰素反应。　

　　自增强的NF-κB激活支持生产的促炎细胞因子和趋化因子单核细胞/巨噬细胞，导致增强细胞激活，NF-κB的低级激活丙肝-harboring单核细胞中观察到隔绝monoinfected病人，而会导致细胞失活状态。丙肝感染中也有先天免疫缺陷的报道。丙肝病毒结构蛋白可以与TLR-2单核细胞和诱导il-10生产，哪些块NF-κB激活单核细胞自分泌的反馈循环，抑制IFN-alpha和白介素生产树突细胞通过旁分泌机制。体外，TLR2和TLR4激活的丙肝病毒核心蛋白导致减少白细胞介素-6生产由人工抗原递呈细胞”的负调控NF-κB的感应激活IRAK-M。此外，在丙肝感染患者外周血单核细胞中，TLR配体诱导的IL-6产生明显减少，与健康对照组相比。因此，单感染患者的最佳丙肝复制可能需要失活的单核细胞，这可能是这些患者先天免疫更普遍失效的一部分。使用抗丙肝蛋白酶可以改变肝外区域细胞库的大小，需要进一步研究。　

　　我们的结果表明，在HIV-丙肝合并感染患者中，外周血单核细胞是一个潜在的重要的肝外丙肝蓄水池，并提示单核细胞的激活可能参与了HIV-丙肝合并感染患者丙肝蓄水池的形成。这可能对清除HIV-丙肝合并感染患者细胞宿主中的丙肝具有重要的治疗意义。详情请扫码咨询：