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ISG转录中TAF的功能

时间:2020-09-29 09:38 来源:www.kangantu.com 作者:康安途海外就医

  几个因素参与组蛋白H1动力学的调节。高迁移率基团蛋白通过动态竞争染色质结合位点来削弱组蛋白H1与核小体的结合。组蛋白变体H3.3与活性基因表达结合进入核小体染色质中,可抵消组蛋白H1的结合。除这些蛋白质外,模板激活因子-I(TAF,也称为SET)调节组蛋白H1动力学,称为组蛋白伴侣。

TAF

  TAF首先被鉴定为体外腺病毒DNA复制的刺激物,随后的研究表明TAF充当组蛋白H3-H4和接头组蛋白H1的组蛋白伴侣。 TAF与哺乳动物体细胞核中的组蛋白H1相关,并在体外显示组蛋白H1伴侣活性。在这项研究中,我们确定了一种通过组蛋白H1和TAF沉默ISG转录的新机制。在IFN介导的转录沉默状态诱导后的转录早期,TAF-1敲低(KD)促进ISG转录。在TAFKD细胞中,ISG启动子上的转录因子水平在IFN诱导后转录的早期阶段增加,并且ISG启动子上的组蛋白H1的数量从转录沉默状态到早期阶段显着降低。 IFN诱导后的转录。

  对于ISG转录中的TAF功能,也需要组蛋白H1伴侣活性必不可少的TAF结构域。组蛋白H1 KD和TAF-1 KD一样增加了ISG转录。双TAF和组蛋白H1 KD不会累加影响ISG转录。在TAFKD和组蛋白H1KD中,ISG启动子的微球菌核酸酶(MNase)敏感性均增加。综合这些发现,我们建议TAF通过其组蛋白H1伴侣活性将组蛋白H1募集到ISG启动子上,抑制ISG启动子上转录复合物的形成并在转录沉默状态下限制异常转录.HeLa S3和HEK293细胞生长在Dulbecco改良的必需培养基中添加10%胎牛血清。本研究中使用的抗体如下:抗STAT1α/β,抗STAT2,抗IRF9,抗磷酸(Tyr701)STAT1,抗磷酸(Tyr689)STAT2,抗磷酸(Ser727)STAT1,抗Pol II,抗β-肌动蛋白,抗组蛋白H3(ab1791; Abcam),抗乙酰基组蛋白H3(06-599; Millipore ),抗组蛋白H1.2(ab4086; Abcam),抗Flag(F3165; SIGMA)和抗TAF-Iα/β(单克隆抗体KM1725)抗体.pU6-puro-siTAF- I,pU6-puro-siH1或pU6-puro-siEGFP使用Gene Juice(Novagen),根据制造商的规程使用。转染后16 h,将嘌呤霉素以2μg/ ml的浓度添加到培养基中,并将细胞进一步孵育20-24 h。在存在嘌呤霉素的条件下进行选择后,将细胞转移至不存在嘌呤霉素的培养基中,并进一步孵育48小时。

  商业上购买了针对TAF和组蛋白H1.2的siRNA。根据制造商的协议,将siRNA与Lipofectamine RNAiMAX(Invitrogen)一起引入HeLa S3细胞。阴性对照Stealth siRNA(12935-200; Invitrogen)被用作阴性对照。在细胞裂解缓冲液中裂解细胞[10-mM Tris-HCl,pH 7.9,300-mM NaCl,1-mM乙二胺四乙酸(EDTA),1%NP-40,10%甘油,5-mMβ-D-甘油磷酸酯,1-mM氟化钠,1-mM原钒酸钠和1-mM苯基甲基磺酰氟(PMSF),并在4°C下恒温旋转30分钟。离心后,将上清液级分在7.5–12.5%的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上分离,并电吸印到硝酸纤维素膜上。将硝酸纤维素膜与特异性抗体孵育,然后与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔抗体,生物素化抗兔Ig或生物素化抗小鼠Ig孵育。链霉亲和素碱性磷酸酶或链霉亲和素-辣根过氧化物酶用于检测生物素化的Ig。现在taf哪能买到?价格是多少?详情可咨询下方微信。

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(责任编辑:康安途海外就医)

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