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奥希替尼治疗可以抑制肿瘤生长

时间:2020-09-28 15:27 来源:康安途 作者:康安途海外就医

  奥希替尼联合培美曲塞或顺铂对PC9T790M异种移植瘤及细胞系模型肿瘤生长的影响。首先,研究奥希替尼联合培美曲塞对PC9T790M(EGFR外显子19e756-a750缺失,T790M阳性)异种移植瘤模型的影响。

  将PC9T790M细胞皮下接种到Balb/c裸雌性小鼠体内,当肿瘤达到平均约150mm3时,将小鼠随机分为4组:单溶剂对照(ctrl);奥希替尼(osi),奥希替尼每周插入培美特里塞(pem)(osi→pem);奥希替尼+培美瑞塞每周与奥希替尼单独插入(osi+pem→osi)。当奥希替尼与培美曲塞(osi→pem)插入时,观察到肿瘤生长抑制30天,之后所有肿瘤又开始生长。相反,在每周单独使用奥希替尼(osi+pem→osi)的奥希替尼加培美拉塞的组中,所有小鼠的肿瘤均在整个实验过程中逐渐消退。监测肿瘤生长110天,在此期间小鼠未出现毒性迹象,体重有规律地增加。

奥希替尼

  为了测试其在肿瘤根除中的治疗效果,停止奥希替尼或奥希替尼联合培美曲塞治疗,并监测小肿瘤的再生。奥希替尼单药治疗后所有4个小肿瘤均迅速复发,而与培美曲塞联合用药后未观察到复发。

  随后,我们检测了顺铂联合奥希替尼是否也能在PC9T790M异种移植物中发挥持久的肿瘤抑制作用。将PC9T790M细胞皮下接种到Balb/c裸雌性小鼠体内,当肿瘤达到平均约150mm3时,将小鼠随机分为三组:单溶剂对照(ctrl);奥希替尼(osi);每周奥希替尼+顺铂(cis)插入单独的奥希替尼(osi+cis→osi)。奥希替尼治疗可以抑制肿瘤生长达45天,然后在8只动物中有4只产生了耐药性。相反,奥希替尼联合顺铂每周插入奥希替尼对所有小鼠的肿瘤生长均有显著抑制作用。然而,与培美曲塞联合使用不同的是,奥希替尼联合顺铂治疗小鼠出现了毒性迹象,78天后停止治疗。有趣的是,在中断治疗后,使用联合药物治疗的动物均未出现肿瘤再生。

  异种移植物组织组成的定量评估是通过形态学测定来评估不同治疗方案对实际肿瘤块的影响,不包括纤维化和坏死。因此,在马松三色染色切片上,我们记录到,与仅使用奥希替尼治疗的小鼠的肿瘤相比,该药物联合培美曲塞或顺铂可有效降低异种移植瘤成分2.79倍和3.42倍。肿瘤区域的收缩伴随着一致的纤维化组织的增加,而坏死对联合治疗的效果没有显著的贡献。

  在所有进展到奥希替尼的肿瘤(8例)中评估了对奥希替尼耐药的潜在机制。在一个奥希替尼耐药肿瘤中,FISH分析发现MET扩增,westernblot分析也证实MET表达水平较高,提示MET扩增可能是奥希替尼耐药的潜在机制。在其他耐药肿瘤(7例)中,使用NGS进行的分析并未揭示文献中描述的耐药的任何主要获得性机制。ddPCR也排除了EGFR基因的三级获得性突变,以避免由于敏感性限制可能出现的NGS假阴性结果。在所有耐药肿瘤中,亲本PC9T790M克隆(p.(Glu746_Ala750del)和p.t790m)的EGFR设置被维持。在6个耐药肿瘤中,FGFR3、FOXL2、GNAQ和H3F3A中发现了亲本PC9T790M克隆中不存在的变异。

  体外实验同时评价了奥希替尼联合培美曲塞或顺铂对PC9T790M细胞增殖和细胞死亡的影响。

  正如之前报道的吉非替尼和培美曲塞以及奥希替尼,长期实验中,在培美曲塞或顺铂交替使用前,奥希替尼对细胞增殖的抑制效果较差,并发挥拮抗作用。相比之下,同时使用奥希替尼和培美曲塞或顺铂显著抑制细胞生长。在短期实验中,4b可以增加60%的细胞死亡。

  培美曲塞或顺铂对PC9T790M奥希替尼耐药克隆的影响:

  为了测试对奥希替尼耐药细胞的化学敏感性,我们在奥希替尼浓度增加(从10nM到500nM)的情况下培养PC9T790M细胞9个月后,产生了两个克隆(osi-RclA,clC)。剂量反应处理曲线显示,奥希替尼的IC50高于5个大爆炸M。两个克隆在EGFR中均保持了19外显子的缺失和T790M突变,但C797S、MET或HER-2的扩增和表型转化均未被确定为潜在的抗性机制。NGS分析没有显示任何获得性突变。拷贝数改变(CNA)分析显示,osi-RclC出现NRAS扩增。ddPCRCNA检测也证实了这一变化。

  有趣的是,当奥希替尼与培美曲塞或顺铂联合使用时,未出现耐药克隆。

  耐药克隆5b、5b、c与PC9T790M亲代细胞一样对顺铂敏感,但对培美曲塞更耐药,正如我们之前报道的对吉非替尼耐药的PC9细胞一样。相对于亲代细胞,TS基因在clA和clC中的表达显著升高,提示该机制可能与耐药有关,这与已发表的文献显示,TS过表达是NSCLC耐培美曲塞治疗的常见机制一致。然而,我们不能排除对奥希替尼耐药的其他机制也可能导致对培美曲塞的耐药。为了进一步证实培美曲塞在奥希替尼耐药细胞中的耐药,我们建立了实验中奥希替尼组出现的耐药肿瘤的两个细胞克隆。与预期的一样,奥希替尼和2a2a细胞克隆的IC50值均大于5°M。与体外培养的耐药克隆结果相对应,来自耐药肿瘤的细胞对培美曲塞的耐药也更强。

  奥希替尼联合培美曲塞或顺铂对PC9和HCC827细胞系细胞增殖和细胞死亡的影响:

  考虑到FDA和EMA根据FLAURA试验结果批准奥希替尼一线治疗EGFR突变的患者,我们计划对携带EGFR突变且对第一代EGFRTKIs敏感的PC9和HCC827细胞系进行体外实验,如吉非替尼和埃罗替尼。

  奥希替尼联合培美曲塞或顺铂不同处理对细胞增殖的抑制和诱导细胞死亡的结果与PC9T790M细胞和前面描述的结果相似。这些数据,即使没有在异种移植模型中得到证实,也表明对于初生患者,培美曲塞或顺铂的存在可以提高奥希替尼在一线治疗中的疗效。

  然后我们研究协会的影响奥希替尼培美曲塞或顺铂转导途径和表达的细胞死亡的细胞内调制监管机构。EGFR,AKT和ERK激活受到强烈抑制奥希替尼PC9和PC9T790M细胞像预期的那样,被这些细胞系奥希替尼高度敏感。培美曲塞或顺铂不影响这些蛋白的磷酸化状态,与奥希替尼联合与单独奥希替尼没有区别。相比之下,联合治疗强烈诱导了促凋亡BCL-2家族成员Bim,增强了caspase7的激活和PARP的裂解。奥希替尼哪里购买?可以在国内买到吗?详情请扫码咨询:

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(责任编辑:康安途海外就医)

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